混合孢子懸浮液的制備

   混合孢子懸浮液制備的要求與過程如下:

   ①使用無菌技術(shù)制各至少包含規(guī)定的試驗菌種的孢子懸浮液。

   ②將純菌種分別培養(yǎng)在合適的培養(yǎng)基上(如馬鈴薯葡萄瓊脂),而球毛殼霉應(yīng)在無機鹽瓊脂表面的濾紙上進行培養(yǎng)。無機鹽瓊脂的配制方法如下:將瓊脂溶解在規(guī)定的1L無機鹽溶液中ρ

   ③試驗前檢查菌種的純度。L7815ABD2T-TR

   ④制備保藏純菌種的次級培養(yǎng)菌種,并在30℃±1°C培養(yǎng)10~21天。

   ⑤向每種次級培養(yǎng)菌種的試管中注入每升含005g無毒潤濕劑的水溶液10mL。

   ⑥用無菌玻璃圓棒、鉑絲或鎳鉻絲在試驗菌種的表面輕刮。

   ⑦將孢子提取液注入125mL帶蓋錐形瓶,瓶內(nèi)裝45mL水、50~70粒直徑為5mm的實心玻璃球。

   ⑧劇烈振蕩錐形瓶,以打碎孢子,從菌絲體中釋放出來。

   ⑨用裝有6mm厚玻璃棉的玻璃漏斗,將霉菌孢子懸浮液過濾到錐形瓶中,以去除打碎的菌絲體碎片和瓊脂塊。

   ⑩將過濾后的孢子懸浮液離心,棄掉上層液。

   在剩余物中加入50mL水重新懸浮并離心。將獲得的每種霉菌孢子至少以這種方法離心3次(直到上層液變清)。

   用無機鹽溶液稀釋己離心的最后剩余物,通過計數(shù)器計算,最終使得每升孢子懸浮液含有1000OO0×(⒒20%)個孢子。

   對試驗用的每一種菌種孢子進行活力檢驗。將相等容積的每種孢子懸浮液混合,得到最后的混合孢子懸浮液。